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四种药物对泥鳅的急性毒性试验

  泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)又称鳅、蝤、土溜、长鱼,属鲤形目,鳅科。泥鳅肉质鲜美,营养丰富,富含蛋白质、多种维生素,其脂肪、胆固醇含量均较低,药用价值明显,素有“水中人参”之称,是人们喜爱的水产佳品。泥鳅作为特种水产养殖的一个重要品种,具有适应性强、疾病发生少、成活率高等特点,一年四季均可上市,具有较高的经济价值。


  急性毒性试验主要是指对试验动物一次给药后所带来的中毒症状及程度,症状出现的时间和持续时间,群体中个体死亡数量,计算出最大给药浓度、最小致死浓度、半致死浓度和安全给药浓度。


  1、材料与方法


  1.1 材料及试剂


  1.1.1 试验动物


  本试验所用泥鳅苗种为全人工繁育的的夏花,培育至3cm左右,从夏花培育池塘捕捞至实验室玻璃钢桶暂养,暂养期间不投饵,适量增加氧气。暂养用水与试验用水均是经过充分曝气的自来水,每天定时检查,清理受伤、体弱、行动迟缓和死亡个体。经3d的暂养,选择体质健壮的鳅苗进行试验。试验用鱼抽样测定体长为(X±SD)2.9±0.6 cm;体重为(X±SD)0.165±0.12 g。


  1.1.2 试验药品


  试验药品由福州联丰生物技术开发有限公司提供,部分从市场采购。药品名称、主要成分和生产商见(表1)。



  表1 试验用渔药种类


  1.2 试验方法


  试验容器为5L小水桶,试验时,每个试验桶加入2L充分曝气的自来水,试验期间水温28.0±1.5℃,溶解氧4.5~7.0 mg/L,pH值为7.1±0.1。将试验药品按照试验浓度所需,在使用前先配置成母液,液体药品直接添加。按设置浓度用移液器定量吸取母液稀释成所需浓度,进行预实验,在预实验得到的浓度范围内各试验药物分别设置5个等对数间距梯度浓度组和1个空白对照组进行正式试验,每个浓度设置2个重复组。每组放置试验鱼苗9尾,试验时间为96h。试验期间不投喂、不充氧,每2d更换1次试验溶液,每天定时观察,及时清理死亡个体,记录统计24h、48h、72h和96h的死亡数。


  1.3 数据分析


  参考相关数据统计方法文献,运用SPSS 17.0版probit模块分析计算得出24h、48h、72h和96h半数致死浓度(LC50);安全浓度(SC)=96hLC50×0.1,用Microsoft Excel 2003进行换算,LC50为96h内引起试验动物死亡一半时的浓度。


  2、结果与分析


  2.1 中毒症状


  不同药物试验组的泥鳅表现不同,聚维酮碘实验组的泥鳅游动迅速,四处冲撞,甚至跳跃,中毒后身体慢慢失去平衡,沉入水底,呼吸减弱,直至死亡;二氧化氯实验组泥鳅游动迅速,呼吸急促,后慢慢潜伏于水底,直至死亡;高锰酸钾实验组泥鳅相对比较安静,无特别明显症状;硫酸铜实验组泥鳅表现出躁动不安,快速游动,出现侧翻、打转,游泳的平衡能力明显受影响,游泳速度也逐渐缓慢,反应逐渐迟钝,直至死亡;同种药物不同浓度实验组的泥鳅,随着浓度增大,泥鳅表现也越强烈,低浓度组的泥鳅中毒症状不明显,与对照组基本相似,多数喜沉底,缓慢游动,随着时间的延长才出现个别的死亡现象。泥鳅中毒死亡的判定标准为是否停止呼吸活动,用玻璃棒或小镊子刺激鱼体,无反应,用镊子夹住泥鳅,20s内不产生应激反应即为死亡。


  2.2 半数致死浓度和安全浓度


  根据试验计算出4种试验药物对泥鳅苗种的24h、48h、72h和96h的半数致死浓度(LC50)和安全浓度(表2)。



  表2 半数致死浓度和安全浓度


  泥鳅苗种对二氧化氯的耐受力较好,生产中实际常用剂量低于安全浓度;对高锰酸钾和聚维酮碘耐受能力中度,常用剂量高于安全浓度,生产中建议慎用;对硫酸铜高度敏感,建议生产中慎用或不用。


  3、讨论


  二氧化氯为强氧化剂,其消毒作用不受养殖水体的各项指标的影响,其生成物为氯化钠、水、微量二氧化碳和有机糖,不会形成二次污染,是一种绿色消毒剂。何义进等(2000)报道,二氧化氯对养殖水体的水质有明显的改善作用。一直以来,在水产养殖中把二氧化氯作为鱼病防治主要使用药物。本试验中,二氧化氯对泥鳅苗种的安全质量浓度(SC)为1.68mg/L;高于丁淑荃等(2006)鳜鱼的0.73mg/L和樊海平等(2012)双色鳗鲡玻璃鳗的0.13mg/L,但低于李莉等(2008)鲶鱼苗的15.1mg/L。二氧化氯在水产养殖中常规泼洒量一般为0.2~0.3mg/L,也高于药物浸浴浓度,因此二氧化氯在泥鳅苗种培育病害防治中作为常规用药是安全的。


  硫酸铜为水产病害防治中的常用药物之一,可杀灭各种寄生虫,亦可杀灭真菌。本试验中对泥鳅苗种的安全质量浓度(SC)为0.005mg/L,与周 剑,杜 军,刘光迅等(2012)用硫酸铜对长薄鳅幼鱼的急性毒性试验结果一致,远低于牟洪民等(2010)鲢鱼种的1.15mg/L、陈生熬等(2011)彩鲫鱼苗的0.64mg/L和李莉等(2008)鲶鱼苗的1.05mg/L。本药品建议在水产养殖中建议用量为0.5mg/L,而通过试验得出泥鳅的安全质量浓度是药品建议浓度的1%,故硫酸铜对泥鳅属于剧毒药品,不能在泥鳅苗种培育过程中使用。


  高锰酸钾具有强氧化剂,是一种常规的外用消毒剂,通过破坏菌体蛋白或酶蛋白而起到灭菌作用,对水生动物的鳃组织有较强的损坏作用,一般作为消毒剂用来治疗指环虫、原虫类、锚头蚤等寄生虫病和对生产工具消毒。本试验中对泥鳅苗种的安全质量浓度(SC)为0.28mg/L,低于李代金等(2010)黑尾近红鲌鱼苗的0.738mg/L、万全等(2010)胭脂鱼的0.75mg/L、田荣(2009)鲮鱼鱼苗的0.61mg/L,略高于吕业坚等(2008)光倒刺鲃的0.27mg/L。高锰酸钾在水产养殖中常规泼洒浓度为2~3mg/L,浸浴浓度为10~20mg/L,而泥鳅苗种的安全浓度为0.28mg/L,是常规使用量的10%,故高锰酸钾在泥鳅苗种培育过程中应慎用或用其他消毒剂替代。


  聚维酮碘是碘和聚乙烯吡咯烷酮的络合物,能够氧化或碘化病原体的巯基化合物、肽、蛋白质、酶、脂质等,而达到杀灭病原体的目的。聚维酮碘是一种杀菌消毒剂,具有低毒、高效、无残留等特点,深受广大水产养殖者的青睐。本试验中对泥鳅苗种的安全质量浓度(SC)为0.27ml/L;低于黄辨非等(2005)育银鲫鱼苗的2.14ml/L和邹雄等(2012)点篮子鱼幼鱼的17.10mg/L,与王广军(2003)丁鱥鱼的0.35mg/L较接近,高于樊海平等(2012)双色鳗鲡玻璃鳗的0.001mg/L。本试验用聚维酮碘常规使用量是0.75mg/L,而泥鳅苗种的安全质量浓度(SC)为0.27ml/L,略低于常规使用量,泥鳅苗种对聚维酮碘敏感,在泥鳅苗种培育中酌情使用,或用其他药物替代。


  4、结论


  试验得出,4种常用水产药物对泥鳅苗种的毒性大小依次为:硫酸铜>聚维酮碘>高锰酸钾>二氧化氯。


  二氧化氯对泥鳅苗种24h、48h、72h和96h的半数致死浓度(LC50)分别为:17.42mg/L、17.419mg/L、16.899mg/L、16.899mg/L,安全浓度(SC)为1.69mg/L;


  硫酸铜对泥鳅苗种24h、48h、72h和96h的半数致死浓度(LC50)分别为:0.107mg/L、0.088mg/L、0.062mg/L、0.055mg/L,安全浓度(SC)为0.005mg/L;


  高锰酸钾对泥鳅苗种24h、48h、72h和96h的半数致死浓度(LC50)分别为:3.964mg/L、3.768mg/L、2.85mg/L、2.85mg/L,安全浓度(SC)为0.28mg/L;


  聚维酮碘对泥鳅苗种24h、48h、72h和96h的半数致死浓度(LC50)分别为:3.564mL/L、3.357mL/L、3.036mL/L、2.74mL/L,安全浓度(SC)为0.27ml/L;


  其中二氧化氯在泥鳅苗种培育病害防治中作为常规用药是相对安全的,可以使用。高锰酸钾和聚维酮碘对泥鳅苗种中毒敏感,在泥鳅苗种培育中酌情使用,或用其他药物替代。硫酸铜对泥鳅属于剧毒药品,不能在泥鳅苗种培育过程中使用。【福建省省属科研院所公益性专项(闽海渔科2013R002-4)】


  作者:福建省淡水水产研究所 何国森 曾占壮 陈度煌 王剑锋


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